美洲大赤魷(you)(DosidicusGigas)在食品(pin)(pin)加(jia)工過程中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)軟(ruan)(ruan)骨廢棄物(wu)為(wei)原料,建立包括(kuo)粉碎、脫(tuo)(tuo)水(shui)脫(tuo)(tuo)脂、酶(mei)(mei)解(jie)、除蛋(dan)白(bai)(bai)、醇沉、離子(zi)(zi)交(jiao)換、脫(tuo)(tuo)鹽(yan)等(deng)操(cao)作流程的(de)(de)(de)(de)(de)CS制備(bei)方法(fa),制備(bei)得(de)到(dao)新(xin)型(xing)(xing)CS。最終(zhong)產(chan)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)產(chan)率(lv)(lv)(lv)達到(dao)16±2%。用(yong)商品(pin)(pin)化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)硫(liu)(liu)酸軟(ruan)(ruan)骨素(su)(su)ABC酶(mei)(mei)、硫(liu)(liu)酸皮膚素(su)(su)酶(mei)(mei)、透明(ming)質(zhi)酸酶(mei)(mei)(來自于StreptomycesHyalurolyticus)、以及(ji)實驗室(shi)自有(you)產(chan)權的(de)(de)(de)(de)(de)rHCLase降解(jie)所得(de)多(duo)糖,根據酶(mei)(mei)的(de)(de)(de)(de)(de)底物(wu)專一性(xing)(xing),確認所制備(bei)的(de)(de)(de)(de)(de)多(duo)糖為(wei)CS;通(tong)過咔唑反應檢測(ce)樣(yang)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)型(xing)(xing)CS含(han)量(liang),BCA蛋(dan)白(bai)(bai)定(ding)(ding)量(liang)法(fa)檢測(ce)樣(yang)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)蛋(dan)白(bai)(bai)含(han)量(liang)。結(jie)果提示(shi)(shi):樣(yang)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)型(xing)(xing)CS含(han)量(liang)達到(dao)97%以上(shang),蛋(dan)白(bai)(bai)含(han)量(liang)低(di)于2%。2.新(xin)型(xing)(xing)CS多(duo)糖結(jie)構的(de)(de)(de)(de)(de)初步(bu)分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi):參照(zhao)葡聚糖分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)量(liang)標準物(wu),經凝(ning)膠過濾HPLC分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi),確定(ding)(ding)所制備(bei)的(de)(de)(de)(de)(de)NER-CS多(duo)糖平均分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)量(liang)約(yue)為(wei)623.2 kDa。再通(tong)過硫(liu)(liu)酸軟(ruan)(ruan)骨素(su)(su)ABC酶(mei)(mei)完全(quan)降解(jie),結(jie)合HPLC分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)二糖組成,發(fa)現NER-CS主(zhu)要(yao)含(han)有(you)GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其(qi)(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)E-unit含(han)量(liang)最高(gao)(gao)可達44.5%,同(tong)時GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含(han)量(liang)分(fen)(fen)(fen)別為(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總(zong)硫(liu)(liu)酸化(hua)度為(wei)1.37。是(shi)一種(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)型(xing)(xing)高(gao)(gao)硫(liu)(liu)酸化(hua)CS。3NER-CS生(sheng)(sheng)物(wu)活(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)初步(bu)分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi):1)用(yong)Aglyco試劑(ji)盒(he)檢測(ce)NER-CS的(de)(de)(de)(de)(de)抗凝(ning)血活(huo)性(xing)(xing),結(jie)果顯(xian)示(shi)(shi):NER-CS抗FⅡa和(he)抗FXa活(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)別為(wei)20±2U/mg和(he)0.9±0.2U/mg,是(shi)陽(yang)性(xing)(xing)對照(zhao)肝素(su)(su)抗FⅡa活(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)10%左右(you),抗FXa活(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)4%左右(you);2)利用(yong)乳腺癌(ai)4T1細胞試驗轉移(yi)模型(xing)(xing),分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)NER-CS在小鼠體內抗腫瘤(liu)(liu)轉移(yi)活(huo)性(xing)(xing),結(jie)果顯(xian)示(shi)(shi):50、100和(he)200μgNER-CS的(de)(de)(de)(de)(de)抑瘤(liu)(liu)率(lv)(lv)(lv)分(fen)(fen)(fen)別為(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同(tong)時陽(yang)性(xing)(xing)對照(zhao)100μg肝素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)抑瘤(liu)(liu)率(lv)(lv)(lv)為(wei)74.6±1.8%;3)用(yong)親和(he)素(su)(su)修飾的(de)(de)(de)(de)(de)CM5芯片固定(ding)(ding)生(sheng)(sheng)物(wu)素(su)(su)化(hua)NER-CS,分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)NER-CS與五(wu)種(zhong)(zhong)(zhong)生(sheng)(sheng)長因子(zi)(zi)、三種(zhong)(zhong)(zhong)選擇素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)互作用(yong)活(huo)性(xing)(xing),結(jie)果顯(xian)示(shi)(shi)NER-CS與生(sheng)(sheng)長因子(zi)(zi)HGF、bFGF相(xiang)(xiang)互作用(yong)活(huo)性(xing)(xing)較(jiao)高(gao)(gao),親和(he)力常數分(fen)(fen)(fen)別為(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖的(de)(de)(de)(de)(de)制備(bei)及(ji)其(qi)(qi)抗腫瘤(liu)(liu)活(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)。