美洲大(da)赤(chi)魷(DosidicusGigas)在(zai)食品(pin)(pin)加工過程(cheng)中(zhong)的(de)(de)軟(ruan)骨廢棄物(wu)(wu)為(wei)(wei)原料,建(jian)立包括粉碎、脫水脫脂(zhi)、酶(mei)解、除蛋白(bai)、醇沉、離(li)子(zi)交換(huan)、脫鹽等操作流(liu)程(cheng)的(de)(de)CS制(zhi)(zhi)(zhi)備(bei)方法(fa),制(zhi)(zhi)(zhi)備(bei)得(de)到新型(xing)CS。最終產品(pin)(pin)的(de)(de)產率達(da)到16±2%。用(yong)(yong)(yong)商品(pin)(pin)化(hua)的(de)(de)硫酸(suan)(suan)軟(ruan)骨素ABC酶(mei)、硫酸(suan)(suan)皮(pi)膚素酶(mei)、透明(ming)質酸(suan)(suan)酶(mei)(來自于StreptomycesHyalurolyticus)、以(yi)及實驗室自有(you)產權(quan)的(de)(de)rHCLase降(jiang)解所(suo)得(de)多(duo)糖,根據酶(mei)的(de)(de)底物(wu)(wu)專一(yi)性(xing)(xing)(xing),確(que)認所(suo)制(zhi)(zhi)(zhi)備(bei)的(de)(de)多(duo)糖為(wei)(wei)CS；通過咔唑反應檢測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)中(zhong)新型(xing)CS含(han)量(liang)(liang)(liang),BCA蛋白(bai)定(ding)量(liang)(liang)(liang)法(fa)檢測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)中(zhong)蛋白(bai)含(han)量(liang)(liang)(liang)。結(jie)果(guo)提示(shi)(shi)：樣(yang)(yang)品(pin)(pin)中(zhong)新型(xing)CS含(han)量(liang)(liang)(liang)達(da)到97%以(yi)上,蛋白(bai)含(han)量(liang)(liang)(liang)低(di)于2%。2.新型(xing)CS多(duo)糖結(jie)構的(de)(de)初(chu)步分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)：參照(zhao)葡聚糖分(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)(liang)標準物(wu)(wu),經(jing)凝膠過濾HPLC分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi),確(que)定(ding)所(suo)制(zhi)(zhi)(zhi)備(bei)的(de)(de)NER-CS多(duo)糖平(ping)均(jun)分(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)(liang)約(yue)為(wei)(wei)623.2 kDa。再通過硫酸(suan)(suan)軟(ruan)骨素ABC酶(mei)完全(quan)降(jiang)解,結(jie)合HPLC分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)二糖組成(cheng),發現NER-CS主要含(han)有(you)GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其(qi)中(zhong)E-unit含(han)量(liang)(liang)(liang)最高(gao)可達(da)44.5%,同(tong)時(shi)GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含(han)量(liang)(liang)(liang)分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總(zong)硫酸(suan)(suan)化(hua)度為(wei)(wei)1.37。是一(yi)種(zhong)新型(xing)高(gao)硫酸(suan)(suan)化(hua)CS。3NER-CS生物(wu)(wu)活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)初(chu)步分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)：1)用(yong)(yong)(yong)Aglyco試(shi)劑(ji)盒檢測NER-CS的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)凝血活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing),結(jie)果(guo)顯(xian)示(shi)(shi)：NER-CS抗(kang)(kang)(kang)FⅡa和(he)(he)抗(kang)(kang)(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)20±2U/mg和(he)(he)0.9±0.2U/mg,是陽性(xing)(xing)(xing)對照(zhao)肝素抗(kang)(kang)(kang)FⅡa活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)10%左(zuo)右(you)(you),抗(kang)(kang)(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)4%左(zuo)右(you)(you)；2)利用(yong)(yong)(yong)乳腺癌(ai)4T1細胞試(shi)驗轉(zhuan)(zhuan)移模(mo)型(xing),分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)NER-CS在(zai)小鼠體內抗(kang)(kang)(kang)腫瘤(liu)轉(zhuan)(zhuan)移活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing),結(jie)果(guo)顯(xian)示(shi)(shi)：50、100和(he)(he)200μgNER-CS的(de)(de)抑瘤(liu)率分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同(tong)時(shi)陽性(xing)(xing)(xing)對照(zhao)100μg肝素的(de)(de)抑瘤(liu)率為(wei)(wei)74.6±1.8%；3)用(yong)(yong)(yong)親和(he)(he)素修(xiu)飾的(de)(de)CM5芯(xin)片固定(ding)生物(wu)(wu)素化(hua)NER-CS,分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)NER-CS與五種(zhong)生長(chang)因子(zi)、三種(zhong)選(xuan)擇素的(de)(de)相互作用(yong)(yong)(yong)活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing),結(jie)果(guo)顯(xian)示(shi)(shi)NER-CS與生長(chang)因子(zi)HGF、bFGF相互作用(yong)(yong)(yong)活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)較高(gao),親和(he)(he)力常數分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖的(de)(de)制(zhi)(zhi)(zhi)備(bei)及其(qi)抗(kang)(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)。