美洲大赤(chi)魷(you)(DosidicusGigas)在食品(pin)(pin)加工(gong)過程中(zhong)(zhong)的(de)軟骨廢(fei)棄(qi)物為(wei)原料,建立包括粉碎、脫水脫脂(zhi)、酶(mei)解、除蛋(dan)(dan)白(bai)、醇沉、離子(zi)交換、脫鹽等操作流程的(de)CS制(zhi)備方法(fa)(fa),制(zhi)備得到新型(xing)CS。最終產(chan)品(pin)(pin)的(de)產(chan)率達(da)到16±2%。用(yong)商品(pin)(pin)化(hua)的(de)硫(liu)酸(suan)(suan)(suan)軟骨素(su)(su)(su)(su)ABC酶(mei)、硫(liu)酸(suan)(suan)(suan)皮膚素(su)(su)(su)(su)酶(mei)、透明質酸(suan)(suan)(suan)酶(mei)(來自于StreptomycesHyalurolyticus)、以及實驗室自有產(chan)權的(de)rHCLase降(jiang)解所得多(duo)糖(tang),根(gen)據酶(mei)的(de)底物專(zhuan)一性(xing)(xing),確(que)(que)認所制(zhi)備的(de)多(duo)糖(tang)為(wei)CS；通過咔唑反應檢測(ce)樣(yang)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)新型(xing)CS含(han)(han)(han)量,BCA蛋(dan)(dan)白(bai)定量法(fa)(fa)檢測(ce)樣(yang)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)蛋(dan)(dan)白(bai)含(han)(han)(han)量。結(jie)果(guo)(guo)提示(shi)：樣(yang)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)新型(xing)CS含(han)(han)(han)量達(da)到97%以上,蛋(dan)(dan)白(bai)含(han)(han)(han)量低于2%。2.新型(xing)CS多(duo)糖(tang)結(jie)構的(de)初步(bu)分(fen)(fen)(fen)(fen)析：參照(zhao)葡聚糖(tang)分(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)量標準物,經(jing)凝膠過濾HPLC分(fen)(fen)(fen)(fen)析,確(que)(que)定所制(zhi)備的(de)NER-CS多(duo)糖(tang)平均分(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)量約為(wei)623.2 kDa。再通過硫(liu)酸(suan)(suan)(suan)軟骨素(su)(su)(su)(su)ABC酶(mei)完全降(jiang)解,結(jie)合HPLC分(fen)(fen)(fen)(fen)析二糖(tang)組成,發現(xian)NER-CS主要含(han)(han)(han)有GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其中(zhong)(zhong)E-unit含(han)(han)(han)量最高可(ke)達(da)44.5%,同時(shi)GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含(han)(han)(han)量分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總硫(liu)酸(suan)(suan)(suan)化(hua)度(du)為(wei)1.37。是(shi)一種(zhong)新型(xing)高硫(liu)酸(suan)(suan)(suan)化(hua)CS。3NER-CS生(sheng)物活(huo)性(xing)(xing)的(de)初步(bu)分(fen)(fen)(fen)(fen)析：1)用(yong)Aglyco試(shi)劑盒檢測(ce)NER-CS的(de)抗凝血活(huo)性(xing)(xing),結(jie)果(guo)(guo)顯示(shi)：NER-CS抗FⅡa和抗FXa活(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)20±2U/mg和0.9±0.2U/mg,是(shi)陽(yang)性(xing)(xing)對(dui)照(zhao)肝(gan)素(su)(su)(su)(su)抗FⅡa活(huo)性(xing)(xing)的(de)10%左(zuo)右(you),抗FXa活(huo)性(xing)(xing)的(de)4%左(zuo)右(you)；2)利用(yong)乳腺(xian)癌4T1細胞試(shi)驗轉移模型(xing),分(fen)(fen)(fen)(fen)析NER-CS在小鼠體(ti)內抗腫瘤(liu)(liu)(liu)轉移活(huo)性(xing)(xing),結(jie)果(guo)(guo)顯示(shi)：50、100和200μgNER-CS的(de)抑瘤(liu)(liu)(liu)率分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同時(shi)陽(yang)性(xing)(xing)對(dui)照(zhao)100μg肝(gan)素(su)(su)(su)(su)的(de)抑瘤(liu)(liu)(liu)率為(wei)74.6±1.8%；3)用(yong)親和素(su)(su)(su)(su)修飾的(de)CM5芯片固(gu)定生(sheng)物素(su)(su)(su)(su)化(hua)NER-CS,分(fen)(fen)(fen)(fen)析NER-CS與五種(zhong)生(sheng)長因子(zi)、三(san)種(zhong)選(xuan)擇素(su)(su)(su)(su)的(de)相互作用(yong)活(huo)性(xing)(xing),結(jie)果(guo)(guo)顯示(shi)NER-CS與生(sheng)長因子(zi)HGF、bFGF相互作用(yong)活(huo)性(xing)(xing)較高,親和力常數分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖(tang)的(de)制(zhi)備及其抗腫瘤(liu)(liu)(liu)活(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)析。