弧菌屬(Vibrio)中霍亂(luan)弧菌(V.cholerae)、引起一(yi)種烈性(xing)腸(chang)道(dao)傳染(ran)病(bing)(bing),發(fa)病(bing)(bing)急、傳染(ran)性(xing)強(qiang)、病(bing)(bing)死率高,屬于國際檢疫傳染(ran)病(bing)(bing)。
霍亂弧菌包括兩個生物型:古典生物型(Classical biotype)和埃爾托生物型(EL-Tor bio-type)。這兩種型(xing)別除個別生物學性狀(zhuang)稍(shao)有不同外,形態和(he)免疫學性基本相同,在(zai)臨床病理及流行病學特征上沒有本質的(de)差(cha)別。自(zi)1817年以來,全球共(gong)發(fa)生了七次(ci)世(shi)界性大(da)流行,前六次(ci)病原是(shi)古典型(xing)霍(huo)亂弧菌(jun),第(di)七次(ci)病原是(shi)埃爾托(tuo)型(xing)所致。
1992年10月在印度東(dong)南部(bu)又發現了一個引起(qi)霍(huo)(huo)亂流行的(de)新血清型(xing)菌(jun)株(0139),它引起(qi)的(de)霍(huo)(huo)亂在臨床表現及傳播(bo)方(fang)式上與古典型(xing)霍(huo)(huo)亂完全相同,但不能(neng)被01群霍(huo)(huo)亂弧菌(jun)診(zhen)斷(duan)血清所凝集,抗01群的(de)抗血清對0139菌(jun)株無(wu)保護性(xing)免(mian)疫(yi)。在水中的(de)存活時間較01群霍(huo)(huo)亂弧菌(jun)長,因而有可能(neng)成為引起(qi)世界(jie)性(xing)霍(huo)(huo)亂流行的(de)新菌(jun)株。
新從病人分離出古典(dian)型霍亂(luan)(luan)弧(hu)菌(jun)(jun)和ELtor弧(hu)菌(jun)(jun)比較典(dian)型,為革(ge)蘭氏陰(yin)性菌(jun)(jun),菌(jun)(jun)體(ti)彎曲呈(cheng)弧(hu)狀或(huo)逗點狀,菌(jun)(jun)體(ti)一(yi)端(duan)有(you)(you)單根鞭毛(mao)和菌(jun)(jun)毛(mao),無(wu)莢膜與芽(ya)胞。經人工培(pei)養后,易失去(qu)弧(hu)形而呈(cheng)桿狀。取霍亂(luan)(luan)病人米(mi)泔水樣糞(fen)便作活菌(jun)(jun)懸滴觀察,可見細菌(jun)(jun)運動極(ji)為活潑,呈(cheng)流星穿梭運動。在液體(ti)培(pei)養基內常呈(cheng)單個、成(cheng)對成(cheng)鏈狀,有(you)(you)的相(xiang)連呈(cheng)S形,甚至螺旋狀。
營養要求不高,在PH8.8~9.0的堿(jian)性蛋白胨水或(huo)平(ping)板中(zhong)生長良好。因其他細菌(jun)在這一PH不易生長,故(gu)堿(jian)性蛋白胨水可作為選擇性增殖霍(huo)亂弧菌(jun)的培養基。在堿(jian)性平(ping)板上菌(jun)落直徑(jing)為2mm,圓形(xing),光(guang)滑(hua),透明。
霍(huo)亂(luan)(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)能(neng)還原硝酸鹽(yan)為(wei)亞(ya)硝酸鹽(yan),靛(dian)基質反(fan)應(ying)(ying)陽性(xing),當培養在含硝酸鹽(yan)及色氨(an)酸的(de)培養基中,產生(sheng)靛(dian)基質與(yu)亞(ya)硝酸鹽(yan),在濃硫酸存(cun)在時(shi),生(sheng)成紅(hong)色,稱為(wei)霍(huo)亂(luan)(luan)(luan)紅(hong)反(fan)應(ying)(ying),但其他非(fei)致病性(xing)弧(hu)(hu)菌(jun)亦有此反(fan)應(ying)(ying),故不(bu)能(neng)憑(ping)此鑒定霍(huo)亂(luan)(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)。EL Tor型霍(huo)亂(luan)(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)與(yu)古典型霍(huo)亂(luan)(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)生(sheng)化(hua)反(fan)應(ying)(ying)有所不(bu)同(tong)。前(qian)者Vp陽性(xing)而后(hou)者為(wei)陰性(xing)。前(qian)者能(neng)產生(sheng)強烈的(de)溶(rong)血素,溶(rong)解羊(yang)紅(hong)細(xi)胞,在血平板(ban)上生(sheng)長的(de)菌(jun)落周圍出現明(ming)顯的(de)透明(ming)溶(rong)血環,古典型霍(huo)亂(luan)(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)則不(bu)溶(rong)解羊(yang)紅(hong)細(xi)胞。個別EL Tor型霍(huo)亂(luan)(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)株亦不(bu)溶(rong)血。
根據弧菌O抗原(yuan)不同,分(fen)成(cheng)Ⅵ個血清群(qun),第Ⅰ群(qun)包括(kuo)霍(huo)亂(luan)弧菌的(de)兩個生物型(xing)。第Ⅰ群(qun)A、B、C三(san)種抗原(yuan)成(cheng)份可將霍(huo)亂(luan)弧菌分(fen)為三(san)個血清型(xing):含(han)AC者為原(yuan)型(xing)(又(you)稱稻葉型(xing)),含(han)AB者為異型(xing)(又(you)稱小(xiao)川型(xing)),A、B、C均有者稱中間型(xing)(彥島型(xing))。
霍亂弧菌古(gu)典(dian)生(sheng)物型(xing)對外(wai)環(huan)境抵抗力(li)較(jiao)弱,EL-Tor生(sheng)物型(xing)抵抗力(li)較(jiao)強,在河水(shui)、井(jing)水(shui)、海水(shui)中可存(cun)活1~3周,在鮮魚,貝殼類食(shi)物上(shang)存(cun)活1~2周。
霍亂弧(hu)菌對熱,干燥,日光,化學消(xiao)毒劑和酸(suan)(suan)均很敏感,耐低(di)溫,耐堿。濕(shi)熱55℃,15分(fen)鐘(zhong)(zhong),100℃,1~2分(fen)鐘(zhong)(zhong),水中加0.5ppm氯15分(fen)鐘(zhong)(zhong)可被殺死。0.1%高錳(meng)酸(suan)(suan)鉀浸泡(pao)蔬菜、水果(guo)可達(da)到消(xiao)毒目的。在正常胃酸(suan)(suan)中僅生存4分(fen)鐘(zhong)(zhong)。
能(neng)發酵葡萄(tao)糖、麥芽(ya)糖、甘露醇(chun)、蔗糖、半乳(ru)糖等產(chan)酸(suan)(suan)(suan)產(chan)氣(qi),遲緩發酵乳(ru)糖。不分解阿拉伯糖、水楊素、衛矛(mao)醇(chun)、鼠李糖、木(mu)糖、側金盞花醇(chun)和肌醇(chun)。氧(yang)化酶、明膠液化試(shi)驗陽(yang)(yang)性(xing)。V-P試(shi)驗大多(duo)數EL-Tor生物型陽(yang)(yang)性(xing),而古典生物型大多(duo)為(wei)(wei)陰性(xing)。霍(huo)亂弧(hu)(hu)菌能(neng)分解色(se)氨酸(suan)(suan)(suan)產(chan)生吲(yin)哚(duo),同時能(neng)還原硝酸(suan)(suan)(suan)鹽(yan)為(wei)(wei)亞(ya)硝酸(suan)(suan)(suan)鹽(yan)。因(yin)此當霍(huo)亂弧(hu)(hu)菌培養(yang)在含硝酸(suan)(suan)(suan)鹽(yan)的蛋白胨水中,所產(chan)生的亞(ya)硝酸(suan)(suan)(suan)鹽(yan)與吲(yin)哚(duo)結(jie)合成亞(ya)硝基吲(yin)哚(duo),滴加濃硫酸(suan)(suan)(suan)即出現薔薇色(se),稱為(wei)(wei)霍(huo)亂紅試(shi)驗陽(yang)(yang)性(xing)。
根(gen)據弧菌O抗(kang)原不同,分成(cheng)Ⅵ個血清群,第(di)Ⅰ群包括(kuo)霍亂(luan)弧菌的兩個生物型(xing)(xing)(xing)。第(di)Ⅰ群A、B、C三種抗(kang)原成(cheng)份可(ke)將(jiang)霍亂(luan)弧菌分為(wei)三個血清型(xing)(xing)(xing):含(han)AC者(zhe)為(wei)原型(xing)(xing)(xing)(又(you)稱(cheng)稻葉型(xing)(xing)(xing)),含(han)AB者(zhe)為(wei)異型(xing)(xing)(xing)(又(you)稱(cheng)小川型(xing)(xing)(xing)),A、B、C均有者(zhe)稱(cheng)中間型(xing)(xing)(xing)(彥島型(xing)(xing)(xing))。
1992年10月在(zai)印度(du)東南部又(you)發現了一個引起(qi)霍(huo)(huo)亂(luan)流行(xing)的(de)新血(xue)清型菌(jun)株(0139),它引起(qi)的(de)霍(huo)(huo)亂(luan)在(zai)臨床表現及傳播方式上與(yu)古(gu)典型霍(huo)(huo)亂(luan)完(wan)全相(xiang)同,但不(bu)能(neng)被01群(qun)霍(huo)(huo)亂(luan)弧菌(jun)診斷血(xue)清所凝集(ji),抗(kang)01群(qun)的(de)抗(kang)血(xue)清對0139菌(jun)株無保(bao)護性免疫。在(zai)水中的(de)存活時(shi)間較01群(qun)霍(huo)(huo)亂(luan)弧菌(jun)長(chang),因而有可能(neng)成為引起(qi)世界性霍(huo)(huo)亂(luan)流行(xing)的(de)新菌(jun)株,推薦使用天津生(sheng)物芯(xin)片生(sheng)產的(de)霍(huo)(huo)亂(luan)弧菌(jun)診斷血(xue)清。
1,普通聚合(he)酶鏈反應(ying)法(fa)
核酸擴(kuo)增技術,即聚(ju)合(he)酶鏈式(shi)反應(polymerase chainreaction,PCR),其基(ji)(ji)(ji)本原理是設計、合(he)成(cheng)兩條寡核苷酸,作為(wei)(wei)引物,對應于待測病原微生物某一(yi)(yi)段特異性序(xu)列(lie)(lie)的兩端(duan),然后在(zai)體外模擬DNA體內復(fu)制的過(guo)程反復(fu)擴(kuo)增,使靶序(xu)列(lie)(lie)放大上(shang)萬(wan)倍甚至上(shang)百萬(wan)倍而被檢(jian)測出來。一(yi)(yi)般(ban)選擇霍亂腸(chang)毒(du)素(cholera enterotoxin,CT)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)ctx的保守(shou)序(xu)列(lie)(lie)作為(wei)(wei)靶基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)。一(yi)(yi)些非產毒(du)株(如(ru)環境來源的菌(jun)(jun)株)有可能通過(guo)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)水平轉移獲(huo)得(de)毒(du)力基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)成(cheng)為(wei)(wei)產毒(du)株,若僅檢(jian)測ctx基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)容易造成(cheng)漏檢(jian)。因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)此(ci),霍亂弧菌(jun)(jun)的其他重要基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin),如(ru)毒(du)力協同調節(jie)菌(jun)(jun)毛A基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(tcp A)、o抗原基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(rfb)、外膜蛋(dan)白基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(omp)以及毒(du)力表達調控基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(toxR)等(deng)也(ye)被選用為(wei)(wei)PcR的靶基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin),這(zhe)大大提高了檢(jian)測的特異度.
2,多重PCR法
與(yu)常規PCR相比,多重PCR一次反應可(ke)檢(jian)測(ce)多個基(ji)因,節省(sheng)了(le)(le)時間和成(cheng)本。國內、外許多學者選用霍亂弧菌的毒素基(ji)因ctx、tcp與(yu)其(qi)(qi)他基(ji)因如(ru)ompW、rfb、hly進行組(zu)合,作為(wei)共(gong)同(tong)的靶(ba)基(ji)因,克(ke)服了(le)(le)由于毒力基(ji)因特(te)異度不夠高(gao)而造成(cheng)的假陽(yang)性。多重PcR同(tong)時可(ke)準確區分不同(tong)血清型的霍亂弧菌和快速鑒定(ding)其(qi)(qi)是(shi)否為(wei)產毒株,可(ke)謂一舉多得,大(da)(da)大(da)(da)提(ti)高(gao)了(le)(le)檢(jian)測(ce)效率(lv)。
3.熒光定量PCR法
熒光(guang)定量PCR自(zi)動化(hua)程度高(gao)、特異性強(qiang)、無(wu)交叉(cha)污染,在霍亂弧菌的(de)快速診斷中得到廣泛應(ying)用(yong)。尤其是近年來,隨著引物與探針的(de)設計更精(jing)確、多(duo)通(tong)(tong)道(dao)熒光(guang)PCR儀的(de)開發與廣泛使用(yong),多(duo)重熒光(guang)定量PCR技術日臻成(cheng)熟,并以其高(gao)通(tong)(tong)量、低成(cheng)本、高(gao)效率等(deng)優(you)點(dian)而(er)廣泛應(ying)用(yong)于病毒、細菌、真(zhen)菌等(deng)多(duo)種病原(yuan)體(ti)的(de)快速檢測,成(cheng)為應(ying)用(yong)的(de)熱點(dian).
與PCR方法相比,基因(yin)(yin)芯片(pian)技(ji)術能同時獲得更多病(bing)原學、生物學方面的(de)信息(xi),從而更為全(quan)面地分(fen)(fen)析、掌(zhang)握病(bing)原微生物的(de)特征(zheng)。Vora等(deng)(deng)運用基因(yin)(yin)芯片(pian)技(ji)術對(dui)多種致病(bing)性(xing)弧菌的(de)毒(du)力、毒(du)素(su)、耐藥(yao)基因(yin)(yin)及潛(qian)在的(de)毒(du)力基因(yin)(yin)進行全(quan)面分(fen)(fen)析,對(dui)掌(zhang)握這些細菌的(de)致病(bing)性(xing)及進行有效預防、控(kong)制等(deng)(deng)具(ju)有重要意義。但(dan)基因(yin)(yin)芯片(pian)成(cheng)本較高,距離推廣應用尚需時間等(deng)(deng)待。
人類在自(zi)然(ran)情況下(xia)是(shi)霍(huo)亂弧(hu)菌的唯一易(yi)感(gan)者(zhe),主要通過(guo)(guo)污染的水源或飲食(shi)物經口(kou)傳染。在一定(ding)條(tiao)件(jian)下(xia),霍(huo)亂弧(hu)菌進入(ru)(ru)小腸(chang)(chang)(chang)(chang)后,依靠鞭毛(mao)的運動(dong),穿過(guo)(guo)粘(zhan)(zhan)膜表面(mian)的粘(zhan)(zhan)液層,可能藉菌毛(mao)作(zuo)用粘(zhan)(zhan)附(fu)于腸(chang)(chang)(chang)(chang)壁(bi)上(shang)皮(pi)細胞(bao)上(shang),在腸(chang)(chang)(chang)(chang)粘(zhan)(zhan)膜表面(mian)迅速繁殖,經過(guo)(guo)短暫的潛伏期后便急驟發病。該菌不(bu)侵入(ru)(ru)腸(chang)(chang)(chang)(chang)上(shang)皮(pi)細胞(bao)和腸(chang)(chang)(chang)(chang)腺,也不(bu)侵入(ru)(ru)血流,僅(jin)在局部繁殖和產(chan)生霍(huo)亂腸(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)素,此毒(du)素作(zuo)用于粘(zhan)(zhan)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao)與腸(chang)(chang)(chang)(chang)腺使腸(chang)(chang)(chang)(chang)液過(guo)(guo)度(du)分泌,從(cong)而患者(zhe)出現上(shang)吐(tu)下(xia)瀉,瀉出物呈“米泔水樣”并含大量(liang)弧(hu)菌,此為本病典型的特征。
霍亂(luan)腸毒素(su)(su)(su)(su)本質是蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質,不耐熱,56℃經(jing)30分鐘,即可破壞其活(huo)性(xing)(xing)。對(dui)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)酶敏感而(er)對(dui)胰(yi)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)酶抵(di)抗。該毒素(su)(su)(su)(su)屬外毒素(su)(su)(su)(su),具有很強的抗原性(xing)(xing)。現(xian)已能將該毒素(su)(su)(su)(su)高度精制成(cheng)晶狀(zhuang),仍(reng)保持極強的生物學活(huo)性(xing)(xing)。
霍亂腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素致病(bing)機理(li)如下(xia):毒(du)(du)(du)素由A和B兩(liang)(liang)個(ge)(ge)亞(ya)單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)組(zu)成(cheng),A亞(ya)單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)又分(fen)為(wei)(wei)A1和A2兩(liang)(liang)個(ge)(ge)肽(tai)鏈,兩(liang)(liang)者依(yi)靠二硫鏈連接(jie)。A亞(ya)單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)為(wei)(wei)毒(du)(du)(du)性(xing)單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei),其(qi)中A1肽(tai)鏈具有酶活性(xing),A2肽(tai)鏈與B亞(ya)單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)結合(he)參與受體(ti)介導(dao)的(de)(de)內吞作用中的(de)(de)轉位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)作用。B亞(ya)單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)為(wei)(wei)結合(he)單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei),能(neng)(neng)特異地識別腸(chang)(chang)上皮細胞上的(de)(de)受體(ti)。1個(ge)(ge)毒(du)(du)(du)素分(fen)子由一個(ge)(ge)A亞(ya)單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)和4℃6個(ge)(ge)B亞(ya)單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)組(zu)成(cheng)多(duo)聚體(ti)。霍亂腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素作用于腸(chang)(chang)細胞膜(mo)表面(mian)上的(de)(de)受體(ti)(由神經(jing)節苷脂(zhi)GM1組(zu)成(cheng)),其(qi)B亞(ya)單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)與受體(ti)結合(he),使毒(du)(du)(du)素分(fen)子變構,A精致單(dan)(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)(wei)(wei)進入(ru)細胞,A1肽(tai)鏈活化(hua),進而(er)激活腺(xian)苷環化(hua)酶(AC),使三磷(lin)酸(suan)腺(xian)苷(ATP)轉化(hua)為(wei)(wei)環磷(lin)酸(suan)腺(xian)苷(cAMP),細胞內cAMP濃(nong)度增高,導(dao)致腸(chang)(chang)粘膜(mo)細胞分(fen)泌功(gong)能(neng)(neng)大為(wei)(wei)亢進,使大量(liang)體(ti)液(ye)和電解質進入(ru)腸(chang)(chang)腔而(er)發(fa)生劇烈吐瀉(xie),由于大量(liang)脫水(shui)和失鹽(yan),可發(fa)生代謝性(xing)酸(suan)中毒(du)(du)(du),血循環衰竭,甚至休克或(huo)死亡。
霍亂(luan)弧菌(jun)產生腸(chang)毒素(su)(su),是(shi)一種劇烈(lie)的(de)致泄毒素(su)(su)。該毒素(su)(su)作用于腸(chang)壁促使(shi)腸(chang)黏膜細(xi)胞極度(du)分泌從而(er)使(shi)水(shui)和(he)鹽過量(liang)排出,導致嚴重脫水(shui)虛(xu)脫;進而(er)引起代謝性(xing)酸中毒和(he)急性(xing)腎功(gong)能衰竭。
引(yin)起烈性腸(chang)道傳染(ran)(ran)病(bing)霍(huo)亂,為我國(guo)的甲類法(fa)定傳染(ran)(ran)病(bing)。在自然情況下,人(ren)類是霍(huo)亂弧(hu)菌的唯一易感者(zhe)。在地方性流(liu)行(xing)區(qu),除病(bing)人(ren)外,無(wu)癥(zheng)狀感染(ran)(ran)者(zhe)也是重要傳染(ran)(ran)源。高(gao)比(bi)(bi)例的無(wu)癥(zheng)狀攜帶者(zhe)有(you)利(li)于(yu)疾(ji)病(bing)的擴散(san),根據衛生狀況,無(wu)癥(zheng)狀攜帶者(zhe)和病(bing)人(ren)的比(bi)(bi)率波動在10:1~100:1之間。
傳(chuan)播途徑主要是通過污染的(de)水源(yuan)或未煮熟(shu)的(de)食物(wu)如海產(chan)品、蔬菜經(jing)口攝入(ru)。居住擁擠,衛(wei)生狀況差,特別是公(gong)用水源(yuan)是造成(cheng)暴發流(liu)行的(de)重(zhong)要因(yin)素。人與人之(zhi)間的(de)直接傳(chuan)播不常(chang)見(jian)。在正常(chang)胃酸條件下,如以水為載(zai)體,需飲入(ru)大于1010個(ge)細(xi)菌(jun)方(fang)能引(yin)起感染;如以食物(wu)作為載(zai)體,由于食物(wu)高強度的(de)緩沖能力(li),感染劑量可減(jian)少(shao)到102~104個(ge)細(xi)菌(jun)。任(ren)何(he)能降低(di)胃中酸度的(de)藥(yao)物(wu)或其他原因(yin),都可使人對(dui)霍亂弧菌(jun)感染的(de)敏感性增加。
病(bing)菌(jun)到達小(xiao)腸后,粘附于(yu)腸粘膜(mo)(mo)表面(mian)并迅速繁(fan)殖,不(bu)侵(qin)入腸上皮(pi)細胞和腸腺,細菌(jun)在(zai)繁(fan)殖過程中(zhong)產生腸毒(du)素而致病(bing)。O1群霍亂(luan)弧菌(jun)感(gan)(gan)染(ran)(ran)可(ke)從無(wu)癥(zheng)狀或輕型腹瀉(xie)到嚴(yan)重(zhong)(zhong)的致死性(xing)腹瀉(xie)。在(zai)古(gu)典生物(wu)(wu)(wu)型霍亂(luan)弧菌(jun)感(gan)(gan)染(ran)(ran)中(zhong),無(wu)癥(zheng)狀者可(ke)達60%,在(zai)El Tor生物(wu)(wu)(wu)型感(gan)(gan)染(ran)(ran)中(zhong),無(wu)癥(zheng)狀者可(ke)達75%。霍亂(luan)弧菌(jun)古(gu)典生物(wu)(wu)(wu)型所(suo)致疾(ji)(ji)病(bing)較El Tor生物(wu)(wu)(wu)型嚴(yan)重(zhong)(zhong)。典型病(bing)例(li)一般在(zai)吞食細菌(jun)后2~3天突然出現劇烈腹瀉(xie)和嘔吐,多無(wu)腹痛,每天大便數次或數十次。在(zai)疾(ji)(ji)病(bing)最嚴(yan)重(zhong)(zhong)時,每小(xiao)時失(shi)水(shui)量(liang)可(ke)高(gao)達1升,排出由(you)粘膜(mo)(mo)、上皮(pi)細胞和大量(liang)弧菌(jun)構成(cheng)的如米泔水(shui)樣的腹瀉(xie)物(wu)(wu)(wu)。由(you)于(yu)大量(liang)水(shui)分和電解質喪失(shi)而導致失(shi)水(shui),代謝性(xing)酸(suan)中(zhong)毒(du),低(di)堿(jian)血癥(zheng)和低(di)容量(liang)性(xing)休(xiu)克及心力不(bu)齊和腎衰竭,如未(wei)經治(zhi)療處(chu)理,病(bing)人(ren)可(ke)在(zai)12~24小(xiao)時內死亡(wang)(wang),死亡(wang)(wang)率(lv)(lv)高(gao)達25%~60%,但若及時給病(bing)人(ren)補充(chong)液體(ti)及電解質,死亡(wang)(wang)率(lv)(lv)可(ke)小(xiao)于(yu)1%。O139群霍亂(luan)弧菌(jun)感(gan)(gan)染(ran)(ran)比(bi)O1群嚴(yan)重(zhong)(zhong),表現為嚴(yan)重(zhong)(zhong)脫水(shui)和高(gao)死亡(wang)(wang)率(lv)(lv),且(qie)成(cheng)人(ren)病(bing)例(li)所(suo)占比(bi)例(li)較高(gao),大于(yu)70%,而O1群霍亂(luan)弧菌(jun)流行高(gao)峰期,兒(er)童病(bing)例(li)約占60%。
病愈后一(yi)些患者可(ke)短(duan)期帶(dai)菌,一(yi)般(ban)不(bu)超過3~4周(zhou),真正的慢性帶(dai)菌者罕(han)見。病菌主要存(cun)在于膽囊中。
患過霍亂的(de)(de)人可(ke)獲(huo)得牢固的(de)(de)免(mian)(mian)疫(yi)力,再感染者少(shao)見。病人在發病數日,血液中即可(ke)出現特異(yi)性抗體,7℃14天抗體滴度(du)達高峰,隨后逐漸(jian)下降至較(jiao)低(di)水平,但能持續約3個月(yue)之外(wai)。病后小腸(chang)內可(ke)出現分泌型lgA。體液抗體與免(mian)(mian)疫(yi)的(de)(de)關系尚不清楚,一般認為局(ju)部SlgA可(ke)在腸(chang)粘膜與病菌之間形成免(mian)(mian)疫(yi)屏(ping)障(zhang),有阻(zu)斷粘附和中和毒素的(de)(de)作(zuo)用。
由(you)于霍亂流(liu)(liu)行迅速(su),且在流(liu)(liu)行期(qi)(qi)間發病(bing)率及死亡率均高,危(wei)害(hai)極大,因(yin)此早期(qi)(qi)迅速(su)和(he)正確的(de)診斷,對(dui)治療和(he)預防本病(bing)的(de)蔓延有重大意義(yi)。
采取病人“米泔(gan)水樣”大便或嘔(ou)吐物。鏡檢(涂片染色及懸滴法(fa)檢查(cha))觀察細菌形態,動力(li)特(te)征。
可將材料(liao)接種(zhong)(zhong)至堿性(xing)蛋白胨水37℃培養6~8小時后(hou),取生(sheng)長物(wu)作(zuo)形(xing)態觀(guan)察,并(bing)轉種(zhong)(zhong)于堿性(xing)平(ping)板作(zuo)分離培養,取可疑菌落(luo)作(zuo)玻片凝集,陽性(xing)者再作(zuo)生(sheng)化反應及生(sheng)物(wu)型(xing)別鑒定(ding)試驗。
取檢(jian)材(cai)或(huo)新鮮堿性(xing)(xing)蛋白胨水培(pei)養物一滴,置于(yu)載玻(bo)片(pian)上,再(zai)加(jia)霍亂弧菌多(duo)價診(zhen)斷血清(qing),加(jia)蓋玻(bo)片(pian),用暗視野(ye)鏡觀察,3分鐘內(nei)運動(dong)被抑(yi)制的即為陽性(xing)(xing),此法(fa)優點是快速而(er)特異操作簡便,但必(bi)須有(you)數量較(jiao)多(duo)的弧菌才檢(jian)出(chu)。
除一(yi)般免疫熒光法(fa)外,還可(ke)用熒光菌(jun)球法(fa)檢查。
霍亂弧菌所致的霍亂,為(wei)烈性(xing)腸道傳染病,曾在(zai)世界(jie)上發生過幾次大流行(xing),至今仍未(wei)平息,因此,霍亂被列為(wei)國境檢疫的傳染病。
霍(huo)亂弧(hu)菌有兩個生物型,一為古典生物型,一為愛爾托生物型,這兩個生物型在形態及血清學性(xing)狀(zhuang)方面幾(ji)乎相同(tong),可作(zuo)第四組(zu)霍(huo)亂噬菌體裂解試驗(yan)(yan),多(duo)粘菌素B敏(min)感試驗(yan)(yan),雞紅細胞凝集試驗(yan)(yan),V-P(服-潑)二氏(shi)試驗(yan)(yan)等試驗(yan)(yan)加以(yi)鑒(jian)別:
本(ben)菌(jun)是需氧(yang)菌(jun),營養(yang)(yang)(yang)要求不高,在普通培養(yang)(yang)(yang)基上生(sheng)長良(liang)好。霍(huo)亂(luan)弧菌(jun)具(ju)有耐堿性,故常用(yong)堿性(pH值8.4~9.2)培養(yang)(yang)(yang)基選擇性分(fen)(fen)離培養(yang)(yang)(yang)本(ben)菌(jun)。在堿性瓊脂平板上生(sheng)長后,呈水滴樣光滑型(xing)菌(jun)落(luo)(luo),而在堿性蛋白(bai)胨液體(ti)培養(yang)(yang)(yang)基中(zhong),生(sheng)長迅速(su),培養(yang)(yang)(yang)6~8小(xiao)時即可(ke)形成菌(jun)膜,利用(yong)這一特點,可(ke)以作快速(su)增菌(jun),進(jin)行鑒定(ding)。在慶大霉素(su)瓊脂平板上,生(sheng)長快,8~10小(xiao)時能生(sheng)長出小(xiao)菌(jun)落(luo)(luo),可(ke)供(gong)鑒定(ding)用(yong)。霍(huo)亂(luan)弧菌(jun)能分(fen)(fen)解(jie)蔗糖(tang)、甘(gan)露醇,產酸不產氣,不能分(fen)(fen)解(jie)阿拉伯(bo)膠糖(tang)。
霍亂弧菌(jun)在未經處理(li)的糞便中(zhong),可(ke)存(cun)(cun)活(huo)(huo)數天(tian);在冰箱(xiang)內的牛奶、鮮肉(rou)和(he)魚蝦水(shui)產品中(zhong)存(cun)(cun)活(huo)(huo)時間(jian)分(fen)別為(wei)(wei)2~4周、1周和(he)1~3周;在室溫下存(cun)(cun)放(fang)的新鮮蔬菜中(zhong),可(ke)存(cun)(cun)活(huo)(huo)1~5天(tian);在砧板和(he)布上可(ke)存(cun)(cun)活(huo)(huo)相(xiang)當長時間(jian);在玻璃、瓷器、塑料和(he)金屬上存(cun)(cun)活(huo)(huo)時間(jian)不超過2天(tian)。霍亂弧菌(jun)古典生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)型在外(wai)界環境(jing)中(zhong)生(sheng)(sheng)(sheng)存(cun)(cun)能(neng)力(li)(li)不強,而愛爾(er)(er)托(tuo)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)型抵(di)抗力(li)(li)較強,在河水(shui)、井水(shui)、池塘(tang)水(shui)和(he)海水(shui)中(zhong)可(ke)存(cun)(cun)活(huo)(huo)1~3周,甚至更長,有時在局部自(zi)然水(shui)中(zhong)也能(neng)越(yue)冬。愛爾(er)(er)托(tuo)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)型弧菌(jun)可(ke)粘附于海洋(yang)甲(jia)殼(ke)類生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)表面,分(fen)泌甲(jia)殼(ke)酶,分(fen)解甲(jia)殼(ke)作為(wei)(wei)營養而長期存(cun)(cun)活(huo)(huo),如愛爾(er)(er)托(tuo)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)型弧菌(jun)被(bei)人工飼(si)養的泥(ni)鰍、鱔魚吞食后,可(ke)在其體內生(sheng)(sheng)(sheng)長繁殖,然后排入水(shui)中(zhong)。
霍(huo)(huo)亂弧菌對熱(re)、干燥、日(ri)光及一般消(xiao)毒(du)劑均很敏(min)感,經(jing)干燥2小時或(huo)加熱(re)55℃10分(fen)鐘(zhong)(zhong)即可死(si)亡,煮沸立(li)即死(si)亡;對酸(suan)敏(min)感,在正常胃酸(suan)中僅(jin)能存(cun)活4分(fen)鐘(zhong)(zhong),接觸1∶5000~1∶10000鹽酸(suan)或(huo)硫酸(suan)、1∶2000~1∶3000升(sheng)汞(gong)或(huo)1∶500000高錳酸(suan)鉀,數分(fen)鐘(zhong)(zhong)即被殺(sha)滅,在0.1%漂白粉中10分(fen)鐘(zhong)(zhong)內(nei)即可死(si)亡。氯化鈉的濃(nong)度高于4%或(huo)蔗糖濃(nong)度在5%以(yi)上的食物、香料、醋及酒等,均不利于霍(huo)(huo)亂弧菌的生(sheng)存(cun)。
正(zheng)常胃酸可殺滅霍(huo)亂(luan)弧菌(jun)(jun),當胃酸分泌缺乏或(huo)低(di)下,或(huo)入侵的(de)霍(huo)亂(luan)弧菌(jun)(jun)數量較多,未(wei)被殺滅的(de)弧菌(jun)(jun)就進(jin)入小腸,在堿(jian)性腸液內(nei)迅速繁(fan)殖,并通過(guo)粘(zhan)(zhan)液對細(xi)菌(jun)(jun)的(de)趨化吸(xi)引(yin)作用、細(xi)菌(jun)(jun)鞭毛(mao)活動及弧菌(jun)(jun)粘(zhan)(zhan)蛋(dan)白溶(rong)解酶和粘(zhan)(zhan)附(fu)素等(deng)的(de)作用,粘(zhan)(zhan)附(fu)于小腸粘(zhan)(zhan)膜的(de)上皮(pi)細(xi)胞表面,并在此大量繁(fan)殖。
此菌產生強烈的外毒素,即霍亂腸毒素,由A亞單位和B亞單位組成。B亞單位與該處粘膜上皮細胞表面受體——神經節苷脂結合,A、B兩種亞單位解離,A亞單位穿過細胞膜進入細胞內,激活腺苷酸環化酶(AC),使細胞內三磷酸腺苷(ATP)轉化為環磷酸腺苷(cAMP),使細胞內環磷酸腺苷含量提高,促使一系列酶反應加速(su)進行,導致(zhi)空腸(chang)(chang)到(dao)回腸(chang)(chang)部腺細(xi)胞(bao)分泌(mi)功(gong)能(neng)亢進,引(yin)起大量液體及(ji)血漿中(zhong)(zhong)的鈉、鉀(jia)(jia)、氯等離子(zi)進入腸(chang)(chang)腔(qiang),由(you)于分泌(mi)功(gong)能(neng)超過腸(chang)(chang)道再吸收能(neng)力(li),從而造成(cheng)嚴重的腹瀉及(ji)嘔吐;由(you)于膽汁分泌(mi)減少(shao),且腸(chang)(chang)腔(qiang)中(zhong)(zhong)有大量水、粘液及(ji)電解(jie)質,故排瀉物呈白(bai)色“米泔水”樣;由(you)于劇(ju)烈吐瀉,導致(zhi)脫水和(he)電解(jie)質丟失,引(yin)起缺鉀(jia)(jia)、缺鈉及(ji)肌(ji)肉痙攣;由(you)于碳酸氫根離子(zi)丟失,酸性(xing)(xing)代謝(xie)物在體內(nei)蓄積,引(yin)起代謝(xie)性(xing)(xing)酸中(zhong)(zhong)毒;由(you)于有效血容(rong)量急劇(ju)減少(shao),血液濃縮,導致(zhi)尿量減少(shao)、血壓下降,甚至休(xiu)克;由(you)于腎(shen)缺血、缺氧,細(xi)胞(bao)內(nei)缺鉀(jia)(jia),導致(zhi)腎(shen)小管(guan)上皮細(xi)胞(bao)變性(xing)(xing)、壞死,造成(cheng)急性(xing)(xing)腎(shen)功(gong)能(neng)衰竭(jie)。
主要(yao)病(bing)變均(jun)由嚴重脫水引起,臨床可見指(zhi)紋(wen)皺縮,皮下(xia)組織及(ji)(ji)肌肉干癟。心、肝、脾等臟(zang)器均(jun)見縮小。內臟(zang)漿膜無光澤。腸腔(qiang)高度擴張、腸內充(chong)滿泔水樣液(ye)體,腸粘膜松(song)弛,但粘膜上皮完整,無潰瘍。膽囊內充(chong)滿粘稠膽汁(zhi)。腎小球及(ji)(ji)間質的毛(mao)細管擴張,腎小管腫脹(zhang)、變性及(ji)(ji)壞死。其他臟(zang)器也有出血、變性等變化。
必須貫徹預(yu)防(fang)為主的方針,作好對(dui)外交往及(ji)入口的檢疫工作,嚴防(fang)本菌傳入,此外應加強水、糞管理,注(zhu)意飲食衛生。對(dui)病人要嚴格隔離,必要時實(shi)行疫區封鎖,以免疾病擴散蔓(man)延。
人群的(de)(de)(de)菌苗(miao)(miao)預防接(jie)種(zhong),可獲良好效果,現用(yong)加熱或化(hua)學藥品殺死(si)的(de)(de)(de)古典(dian)型(xing)霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)菌苗(miao)(miao)皮下接(jie)種(zhong),能(neng)降低發病率。這種(zhong)苗(miao)(miao)菌對EL-Tor型(xing)霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧菌感(gan)染也(ye)有(you)保(bao)護作用(yong),但(dan)持(chi)續時間短,僅3-6個月。目前有(you)新型(xing)的(de)(de)(de)口服rBS/WC疫(yi)(yi)苗(miao)(miao)(重(zhong)組B亞(ya)單位/霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)菌體(ti)疫(yi)(yi)苗(miao)(miao))可用(yong)于預防霍(huo)(huo)亂(luan)(luan),2000年WHO關于霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)疫(yi)(yi)苗(miao)(miao)的(de)(de)(de)意見書提出,“應考慮對有(you)罹患(huan)霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)危險(xian)性的(de)(de)(de)人群使用(yong)rBS/WC疫(yi)(yi)苗(miao)(miao)”。該疫(yi)(yi)苗(miao)(miao)對霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)的(de)(de)(de)保(bao)護期為3年,國內有(you)上海聯合賽爾生物工(gong)程有(you)限公司(si)生產(chan)rBS/WC疫(yi)(yi)苗(miao)(miao)。
治療主要為及(ji)時補充液體和電解質(zhi)及(ji)應(ying)用抗菌(jun)藥物如鏈霉(mei)素、氯霉(mei)素、強力霉(mei)素、復方SMZ-TMP等(deng)。