一、石蠟切片厚度一般為多少
石蠟切片厚度(du)通常(chang)(chang)為4~7微(wei)米,切(qie)出(chu)一片接一片的(de)(de)蠟帶,用毛(mao)筆(bi)輕(qing)托輕(qing)放在紙上。這(zhe)(zhe)個厚度(du)通常(chang)(chang)可(ke)以滿(man)足大部分(fen)實驗(yan)室的(de)(de)需求。如果需要更薄的(de)(de)切(qie)片厚度(du),則可(ke)以使(shi)用微(wei)切(qie)機(ji)進行切(qie)割,厚度(du)可(ke)達1-2微(wei)米,但(dan)這(zhe)(zhe)種(zhong)切(qie)片會更脆弱,操作(zuo)難度(du)更大。
二、石蠟切片制作過程是什么
石(shi)蠟切片的制(zhi)作步驟如下:
1、組織包埋
(1)乙醇脫水:組(zu)織經不同(tong)濃度的乙醇溶液(ye)進(jin)行逐級脫水(shui)(shui)70%、80%、90%、95%、100%、100%,各(ge)級乙醇 40min(注意:骨性及鈣化組(zu)織需(xu)在JYBL-Ⅱ脫鈣液(ye)中浸泡(pao)24h,待組(zu)織軟化后再進(jin)行乙醇脫水(shui)(shui)步驟(zou))。
(2)透明:組(zu)織依次(ci)浸泡于三個(ge)二甲(jia)苯中,每缸(gang)各1h。
(3)浸蠟:組織依次浸泡于(yu)三個(ge)石(shi)蠟缸中,每缸各1h。
(4)包埋:將(jiang)液態(tai)的(de)石(shi)蠟倒入模具(ju)盒中(zhong),再將(jiang)浸好蠟的(de)組織塊(kuai)平放底部,注(zhu)意(yi)切面方向朝下放置,待(dai)石(shi)蠟凝(ning)固后(hou)去掉包埋框,完全冷卻(que)變(bian)硬后(hou)再修整蠟塊(kuai),組織外圍的(de)石(shi)蠟保留適(shi)中(zhong)以便切片。
2、切片與貼片
切片制作將預冷的蠟塊固定在石蠟切片機上,使石蠟塊的(de)切(qie)面與刀口成(cheng)平行方向,刀的(de)傾斜(xie)度通常15℃,轉動(dong)輪轉推進器,調節切(qie)片厚度為(wei)4μm,切(qie)成(cheng)厚度均(jun)勻(yun)的(de)切(qie)片。
左手持毛筆,右手旋動切片機轉把,切片帶出來之后,用毛筆輕輕托起,再用鑷子輕鑷蠟片,以正面放入展片箱中,其水溫45℃左右。待攤平整后撈片。貼附切片左手持載玻片之一端,垂直入水去附貼切片,右手用鑷子輔助推動,附貼至玻片上的三分之二處。切片貼附后,放在(zai)空氣中稍晾干,放置(zhi)65℃烤片機上(shang)烤1h,再放置(zhi)烘箱內(nei)烘烤2h。
3、石蠟切片脫蠟至水
依次將石蠟(la)切片放入二甲(jia)(jia)苯Ⅰ10min-二甲(jia)(jia)苯Ⅱ10min-二甲(jia)(jia)苯Ⅲ10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-90%酒(jiu)精5min-80%酒(jiu)精5min-70%酒(jiu)精5min-50%酒(jiu)精5min梯度脫蠟(la)。
4、HE染色
石蠟切片入蘇(su)木素(su)染0.5-1分鐘min,自(zi)來水漂(piao)洗(xi),1%鹽酸酒精分化(hua)數秒(miao),自(zi)來水漂(piao)洗(xi),然(ran)后1%氨水水溶液返藍(lan)1min,流(liu)水沖洗(xi)數秒(miao),放入伊紅染液中染色數秒(miao),流(liu)水漂(piao)洗(xi)。
5、脫水封片
石蠟切片(pian)(pian)依次放入(ru)75%乙(yi)醇(chun)2min-85%乙(yi)醇(chun)2min-無(wu)水乙(yi)醇(chun)5min-無(wu)水乙(yi)醇(chun)5min-二甲(jia)苯5min透(tou)明,將切片(pian)(pian)從(cong)二甲(jia)苯拿出來(lai)中性(xing)樹膠(jiao)封片(pian)(pian)。