一、apoe基因檢測是什么意思
APOE基因檢測,又稱載脂蛋白E基因檢測,APOE是apolipoprotein E的(de)(de)縮寫,翻譯過來就是載(zai)脂蛋白(bai)E,它(ta)是一種多(duo)(duo)態(tai)(tai)性蛋白(bai),參與(yu)脂蛋白(bai)的(de)(de)轉化與(yu)代謝過程,其基因可以(yi)調節許多(duo)(duo)生物學功能,與(yu)許多(duo)(duo)眼(yan)科疾病(bing)發病(bing)有(you)(you)關,對(dui)(dui)ApoE及其基因多(duo)(duo)態(tai)(tai)性的(de)(de)研究是醫學研究的(de)(de)熱點之一,探討兩者(zhe)之間(jian)的(de)(de)內(nei)在聯(lian)系,對(dui)(dui)眼(yan)病(bing)的(de)(de)預防、診(zhen)斷及治療具(ju)有(you)(you)重要的(de)(de)臨(lin)床應用價值。
二、APOE基因檢測的意義
在臨床上(shang)通過APOE基因檢測主要是(shi)針對于載(zai)脂蛋白e基因的檢測,一般可(ke)將患(huan)者分為E2、E3、E4三個表現(xian)型,每個表現(xian)型在不同的疾(ji)病的發生率上(shang)都有(you)不同的特點。
我國大多數人群屬于(yu)E3表現(xian)型(xing),屬于(yu)相對(dui)較(jiao)為均衡的(de)(de)類型(xing)。E4表現(xian)型(xing)患者出現(xian)動脈粥樣硬(ying)化、冠(guan)(guan)狀(zhuang)動脈粥樣硬(ying)化性(xing)心臟病和癡呆(dai)(dai)的(de)(de)風險相對(dui)比較(jiao)低,黃斑(ban)變(bian)性(xing)導致視力損(sun)害(hai)的(de)(de)可能(neng)性(xing)相對(dui)較(jiao)高(gao)。E2表現(xian)型(xing)患者幾乎不太可能(neng)出現(xian)黃斑(ban)變(bian)性(xing),但是出現(xian)癡呆(dai)(dai)和冠(guan)(guan)心病的(de)(de)風險相對(dui)反而過高(gao)。
三、APOE基因檢測的方法
APOE基因檢測既可(ke)以以VLDL為樣品(pin),又可(ke)以直接(jie)以血清(或血漿)為樣品(pin),通過IEF電泳(yong)分析、雙向PAGE或結合(he)免疫印跡法(fa)進行測(ce)定:
1、等電聚焦法(IEF)
由于三種主要ApoE異(yi)構(gou)(gou)體(ti)E2、E3和E4的等電(dian)(dian)點(pⅠ)分(fen)別為5.89、6.02和6.68,E4比(bi)E3多一(yi)個正電(dian)(dian)荷,而(er)E2比(bi)E3少一(yi)個正電(dian)(dian)荷。因此,可應用1EF檢測這些異(yi)構(gou)(gou)體(ti)間電(dian)(dian)荷差(cha)異(yi)而(er)確定不同ApoE表型(xing)。傳統ApoE表型(xing)檢測方法(fa)多采用超(chao)速離(li)(li)心法(fa)或化學沉淀法(fa)分(fen)離(li)(li)VLDL,脫脂后進行(xing)(xing)IEF,然后進行(xing)(xing)染色(se)(se)分(fen)析。這種方法(fa)需(xu)要血(xue)清量較多,昂貴、費時,又需(xu)要大型(xing)設(she)備,不適合大規(gui)模研(yan)究。ApoE異(yi)構(gou)(gou)體(ti)之間染色(se)(se)程度之間差(cha)異(yi)及(ji)電(dian)(dian)泳過程中泳動距離(li)(li)的變(bian)異(yi)性也造成結果的不穩定性。
2、雙相電泳法(two-dimensional electrophoresis)
第一(yi)相(xiang)應用(yong)IEF電泳將等電點不同的蛋(dan)白質(zhi)(zhi)分(fen)(fen)(fen)離(li);第二(er)相(xiang)根據(ju)蛋(dan)白質(zhi)(zhi)分(fen)(fen)(fen)子(zi)量不同及(ji)濃度(du)的差(cha)異,應用(yong)SDS-PAGE進(jin)行(xing)分(fen)(fen)(fen)離(li),由此(ci)確(que)定ApoE表型。此(ci)技術(shu)能解決IEF遇到(dao)的一(yi)些轉錄(lu)后(hou)修飾(shi)的問題,臨(lin)床(chuang)標本用(yong)量也很少(shao),并(bing)且(qie)可以(yi)同時(shi)進(jin)行(xing)定性和定量分(fen)(fen)(fen)析,但由于成本昂貴而且(qie)費(fei)時(shi),有時(shi)也難(nan)以(yi)清(qing)晰地分(fen)(fen)(fen)辨表型,故臨(lin)床(chuang)上應用(yong)較少(shao)。
3、免疫印跡法(immunoblotting)
血清脫(tuo)脂后,經(jing)IEF電(dian)泳將ApoE與(yu)其他蛋(dan)白質(zhi)分離(li),然(ran)后將凝膠(jiao)中蛋(dan)白質(zhi)轉移到硝酸(suan)纖維(wei)素(NC)膜上,用抗ApoE抗體(ti)作(zuo)為一(yi)抗進行免(mian)疫印跡反應(ying)或采用直接的(de)免(mian)疫固定法(fa),即可靈敏而特異地顯(xian)示出ApoE區帶(dai)的(de)位置,從(cong)而確定ApoE表(biao)型。此方法(fa)利用抗原-抗體(ti)的(de)特異反應(ying),排除(chu)了血清其他蛋(dan)白質(zhi)的(de)干擾,不需超速(su)離(li)心分離(li)VLDL,血清用量少,是(shi)國(guo)內外實(shi)驗室檢測(ce)ApoE表(biao)型常用的(de)方法(fa)之一(yi)。但此類方法(fa)亦(yi)存在(zai)一(yi)些(xie)缺點,如對于(yu)存在(zai)與(yu)普(pu)遍異構體(ti)具有相同電(dian)荷的(de)罕(han)見異構體(ti)標(biao)本(ben),或在(zai)糖尿病等病理狀態時(shi),由于(yu)轉錄(lu)后修飾引起(qi)蛋(dan)白質(zhi)變化的(de)標(biao)本(ben)檢測(ce)時(shi),就會給(gei)出錯誤的(de)結果。