一、培養基的制備常見問題及原因分析

培(pei)養(yang)基(ji)的(de)(de)配制是微生物實驗人員的(de)(de)基(ji)本技能(neng)之一(yi)，適宜的(de)(de)培(pei)養(yang)基(ji)制備方法、選擇正確的(de)(de)滅菌方式、貯藏條(tiao)件(jian)和質(zhi)量(liang)控(kong)制試(shi)驗是提(ti)供優質(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)(de)保證(zheng)，在(zai)制備培(pei)養(yang)基(ji)的(de)(de)過程中，可能(neng)會遇(yu)到(dao)以下(xia)幾種問(wen)題：

1、培養基不能凝固

（1）制備(bei)過程中過度加熱。

（2）低pH造成培養基酸解。

（3）稱量不(bu)正確瓊(qiong)脂未(wei)完全溶解。

（4）培(pei)養基成分未充分混勻。

2、pH不正確

（1）制備(bei)過程(cheng)中過度加熱。

（2）水質不佳。

（3）外部化學物質(zhi)污染(ran)。

（4）測定(ding)是溫度不正確(que)。

（5）pH計為(wei)正確校準。

（6）脫(tuo)水培養(yang)基質(zhi)量差。

3、顏色異常

（1）制備過程過度加熱。

（2）水質不佳。

（3）pH不正確。

（4）外來污染。

（5）脫(tuo)水(shui)培養基質量差。

4、產生沉淀

（1）制備過(guo)程(cheng)過(guo)度加熱。

（2）水質不佳。

（3）pH不正確。

（4）原(yuan)料中的雜質。

（5）脫(tuo)水培養基(ji)質量(liang)差。

5、培養基出現抑制/低生長率

（1）制備過(guo)程過(guo)度(du)加(jia)熱(re)。

（2）水質不佳。

（3）脫(tuo)水培養基質量差。

（4）使用成分不(bu)正確，添加劑用量不(bu)正確。

（5）容(rong)器或(huo)水中的有毒殘(can)留(liu)物(wu)。

6、選擇性差

（1）制備過程(cheng)過度加熱(re)。

（2）脫水培養基質量差。

（3）配方使(shi)用不對。

（4）添(tian)(tian)加成(cheng)(cheng)分不(bu)正確，例如添(tian)(tian)加成(cheng)(cheng)分是培養基過熱、添(tian)(tian)加濃度錯(cuo)誤等。

7、污染

（1）無菌操(cao)作(zuo)存(cun)在問題。

（2）添加劑污染。

（3）不適當滅菌

二、制備培養基如何減少失敗率

制備(bei)培養基(ji)的時候(hou)，因(yin)為操作不當(dang)可能會出現(xian)各種問題(ti)，導(dao)致制備(bei)失(shi)敗，為了(le)減少失(shi)敗率，制備(bei)培養基(ji)時要注意：

1、選擇合適的培養基配方

同(tong)一(yi)種培養(yang)基的配(pei)方在不同(tong)著作中常會有某些差別。因此，除所(suo)用(yong)(yong)的是標準方法，應(ying)嚴格按其規定進行配(pei)制外，一(yi)般均應(ying)盡量收集(ji)有關資料，加以比較核對，再依據(ju)自(zi)己的使用(yong)(yong)目的加以選用(yong)(yong)，記錄其來源。

2、培養基成分的稱取要精確

培養(yang)基的各種成(cheng)分必須精確稱取并要(yao)注(zhu)意(yi)防止錯亂，最好一(yi)次完(wan)成(cheng)，不要(yao)中斷。可將配方置(zhi)于傍側(ce)，每稱完(wan)一(yi)種成(cheng)分即(ji)在配方上做出記號，并將所需稱取的藥品一(yi)次取齊，置(zhi)于左(zuo)側(ce)，每種稱取完(wan)畢后(hou)，即(ji)移放于右側(ce)。完(wan)全(quan)稱取完(wan)畢后(hou)，還應進(jin)行一(yi)次檢查。

3、培養基各成分的混合和溶化要注意

培(pei)養(yang)基所用(yong)(yong)化學藥品均應是化學純的(de)。使(shi)(shi)用(yong)(yong)的(de)蒸(zheng)煮鍋(guo)(guo)不(bu)得為銅鍋(guo)(guo)或(huo)鐵鍋(guo)(guo)，以防有微量銅或(huo)鐵混入培(pei)養(yang)基中(zhong)，使(shi)(shi)細菌(jun)不(bu)易生長。最好(hao)使(shi)(shi)用(yong)(yong)不(bu)銹鋼鍋(guo)(guo)加(jia)熱溶化，也(ye)可放入大燒(shao)杯或(huo)大燒(shao)瓶中(zhong)置(zhi)高壓蒸(zheng)汽(qi)滅(mie)菌(jun)器(qi)或(huo)流動(dong)蒸(zheng)汽(qi)消毒(du)器(qi)中(zhong)蒸(zheng)煮溶化。在鍋(guo)(guo)中(zhong)溶化時、可先用(yong)(yong)溫水加(jia)熱并隨時擾動(dong)，以防焦化、如發現有焦化現象、該(gai)培(pei)養(yang)基即不(bu)能使(shi)(shi)用(yong)(yong)，應重新制備。待大部(bu)分固體成分溶化后，再用(yong)(yong)較小(xiao)火(huo)力使(shi)(shi)所有成分完(wan)全溶化。

4、調整好pH

培養(yang)基(ji)(ji)(ji)各成(cheng)分完全溶解(jie)后，應進行(xing)pH的初步(bu)調(diao)正，因(yin)培養(yang)基(ji)(ji)(ji)在加熱消毒過程(cheng)中、pH會有(you)(you)所(suo)變化，例如，牛肉浸(jin)液(ye)約(yue)可降低pH0.2。而腸浸(jin)液(ye)pH卻會有(you)(you)顯著的升高。因(yin)此，對這(zhe)個步(bu)驟，操(cao)作者(zhe)應隨時注意探索經驗、以(yi)(yi)期(qi)能(neng)掌握培養(yang)基(ji)(ji)(ji)的最終(zhong)pH，保證培養(yang)基(ji)(ji)(ji)的質量(liang)。pH調(diao)正后，還應將培養(yang)基(ji)(ji)(ji)煮沸數分鐘，以(yi)(yi)利培養(yang)基(ji)(ji)(ji)沉淀物的析出。